酶标仪长时间动力学读板模式助力微生物生长监测

动力学读板模式是酶标仪除终点法之外最常用的检测模式，用于测量样品在一段时间内发生的变化，长期动力学测量可用于研究生物学的众多方面，如酶动力学、细胞信号传导和蛋白质表达。

然而，在酶标仪上运行这样一个长期连续动态读取的实验需要占用酶标仪很长一段时间，大大降低了仪器的使用效率。此外，进行一系列终点法读取会产生一个一个的单独数据，必须手动将它们连接在一起才能生成动力学曲线图。使用 Molecular Devices 公司的酶标仪和 SoftMax Pro 软件，研究人员现在可以使用软件的中断和继续读板功能进行长时间测量 (图 1) 。这些功能允许从仪器中移除微孔板进行培养基添加或其他实验，然后恢复动力学读数，同时将所有数据点保留在单个孔板中，以便于分析。

非连续动态读取方式的细菌生长测量操作

这里向大家介绍如何使用非连续动态读取方式通过 600 nm 的吸光度进行 24 小时细菌生长测量。在时间零点启动了动力学读板。要中断动力学测量，在 SoftMax Pro 软件的“控制与状态”区域点击“中断”按钮。仪器在暂停前完成了所选读取区域中剩余孔的读取。然后将板从酶标仪中取出。对于动力学读取的下一个时间点，将孔板放入酶标仪。打开原始数据文件，点击继续 (Append) 按钮以恢复动力学读取并添加更多数据点 (表 1) 。

细菌生长曲线的数据整合与参数分析

继续 (Append) 功能将不连续的测量结果连接成一个连续的细菌生长曲线。在 SoftMax Pro 软件中计算细菌生长曲线的开始时间，比较细菌生长条件。设置数据归一化，计算细菌培养达到 0.6 OD 值所需的起始时间，并计算细菌生长曲线拐点处的斜率 (表 2) 。

细菌培养会经历四个阶段：延滞期、对数期、稳定期和衰退期 (图 2) 。本实验采集了足够多的数据点，以生成三种不同细菌培养物的细菌生长曲线 (图 3) 。数据显示，每种培养物在不同时间依次经历延滞期、对数期和稳定期。图中未观察到衰退期，因为仪器所采用的光散射法测量的是样本的质量而非单个细胞。死亡细胞仍占据样本的质量，并对光散射产生影响，从而影响 OD 600 值

利用 SoftMax Pro 软件可以计算细胞生长的各种参数。通过计算细菌培养物达到特定光密度时的时间，可以对生长速率进行定量比较。在本实验中，可以观察到在 10 倍稀释的培养物中所需时间最短 (表 2) 。

细菌生长曲线在抗菌化合物筛选中的应用

检测细菌生长曲线的另一个用途是开发和优化检测方法来筛选抗菌化合物，这是许多微生物和药物开发实验室感兴趣的方向。使用 SoftMax Pro 软件中的工作流编辑器 (Workflow Editor) 功能记录细胞密度和转染的 GFP 信号随时间变化的过程，并进行各种数据转换，例如将 GFP 信号归一化为细胞密度，以及提取生长速率或其他动力学相关信息。